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外周血淋巴细胞染色体标本制备与分析

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浏览:次 2017-05-31 14:26:13

外周血淋巴细胞染色体标本制备与分析 外周血淋巴细胞染色体标本制备与分析 1. 转化细胞采血及接种培养1.1 在酒精灯火焰上,用灭菌注射器(1次性注射器)抽取肝素0.2ml,使肝素湿润至管壁。1.2 常规消毒后,收集外周静脉血5ml,转动注射器使血液与肝素混匀。1.3 在超净工作台中,预先将RPMI 1640液体培养基(5ml,含植物血凝素60mg/ml、10%小牛血清)加入消毒好的小培养瓶中,再滴加25滴全血(6号针头),水平摇动混匀。1.4 置37℃恒温培养箱中培养72小时。培养进程中每天水平摇动培养物1~2次,使血液均匀悬浮,再继续培养。1.5 终止培养前2~4小时,加入秋水仙素,使终浓度到达0.2μg/ml。轻轻摇动培养瓶,使秋水仙素混匀。继续培养至72小时。2.制片2.1 搜集转化细胞时,去掉瓶塞,用乳头吸管汲取培养液,充分混匀培养物,再将全部培养物吸入刻度离心管中。 1. 转化细胞采血撕裂试验机及接霰弹冲击试验机种培养1.1 在酒精灯火焰上,用灭菌注射器(1次性注射器)抽取肝素0.2ml,使肝素湿润至管壁。1.单体燃烧试验机2 常规消毒后,收集外周静脉血5ml,转塑料燃烧试验机动注射器使血液与肝汽车碰撞试验机素混匀。气动插头插座插拔试验机1.3 在超净工作台中,预先将RPMI 1640液体培养基(5ml,含植物血凝素60mg/ml、10%小牛血清)加入消毒好的小培养瓶中,再滴加25滴全血(6号针头),水平摇动混匀。1.4 置37℃恒温培养箱中培养72小时。培养进程中每天水平摇动培养物1~2耐洗色牢度试验机次,使血液均匀悬浮,再继续培养。1.5 终止培养前2~4小时,加入秋水仙素,使终浓度到达0.2μg/ml。轻轻摇动培小型万能试验机养瓶,使指针式戳穿强度试验机秋水仙素混匀。继续培养至72小时。
2.保温材料万能试验机制片2.1扭转卷绕试验机 搜集转化细胞时,去掉瓶塞,用乳头吸管汲取培养液,充分混匀培养物,再将全部培养物吸入刻度离心管中。2.2 1000 rpm离心8分钟(注意先配平)拉链综合强力试验机。2.3 弃上清液,加入37℃预温的 0.075 mol/L KCl溶液8 ml,用吸管轻轻奏乐细胞团混匀后,置37℃恒温水浴箱低渗处理25分钟抗龟裂抗皱褶试验机。2.4 加入 1m煤矿用非金属瓦斯输送管材落锤冲击试验机l新配制的固定剂(甲醇:冰乙酸=3:1),用吸管谨慎plg200c高频疲劳试验机奏乐、混匀,1000rpm离心8分钟。2.5 弃上清液,加入8ml固定剂,奏乐细胞团制成细胞电动抗折试验机悬液后,室温下固定20分钟。2.6 100Qsun日晒色牢度试验机0 rpm离心 8分钟。2.7 弃上清液,重复固定1次。2.8 弃上清液,根据细胞数量橡胶可塑度试验机的多少适当加入数滴新配制的固定剂,奏乐细胞制水射流试验机成悬液。2.9 吸拉力试验机耐黄变试验机取少许细胞悬液,滴2~3滴于冰水浸泡过箱包提把振动试验机的载玻片上,吹散,气干。2.10 将标本置G玻璃钢试验机iemsa染液中,染色8分钟,水洗去浮色,气干。2.mm2000型摩擦磨损试验机11 转化楔压强度试验机细胞显微镜下视察染色体标本分裂相的多少及分散情况。
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