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食品中葡萄糖的测定

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浏览:次 2017-06-07 10:14:17

食品中葡萄糖的测定 食品中葡萄糖的测定   葡萄糖氧化酶法  1.原理  葡萄糖在葡萄糖氧化酶的作用下产生葡萄糖酸和过氧化氢,过氧化氢在过氧化物酶的作用下使邻联甲苯胺生成蓝色物资,此有色物资在625nm波长下与葡萄糖浓度成正比。通过测定蓝色物资的吸光度可计算样品中葡萄糖的含量。  2.适用范围  适用于谷类、乳类、饮料、酒类等食品样品和血液样品。检出量为0.02 mg。  3.仪器  722光度计'>分光光度计。  4.试剂:  除特殊说明外,实验用水为蒸馏水,试剂为分析纯。  (1) 乙醇。  (2) 40% 3氯乙酸:称取40g 3氯乙酸,用水溶解并稀释至100ml。  (3) 2 mol/L NaOH 溶液:称取8g NaOH, 用水溶解并稀释至100ml。  (4) 1 % 邻联甲苯胺溶液:称取0.1 g 邻联甲苯胺溶解于10 ml无水乙醇中

  葡萄糖氧化酶法

  1.原理

  葡萄糖在葡萄糖氧化酶的作用下产生葡萄糖酸和过氧化氢,过氧化氢在过氧化物酶的作用下使邻联甲苯胺生成蓝色物资,此有色物资在625nm波长下与葡萄糖浓度成正比。通过测定蓝色物资的吸光度可计算样品中葡萄糖的含量。

  2.适用范围

  适用于谷类、乳类、饮料、酒类等食品样品和血粉尘实验机液样品。检出量为0.02 mg。

  3.仪器

  722光度计'>分光光度计。

  4.试剂:

  除特殊说明外,实验用水为蒸馏水,试剂为分析纯。

  (1) 乙醇。

  (2) 40% 3氯乙酸:称取40g 3氯乙酸,用水溶解并稀释至100ml。

  (3) 2 mol/L 扣件力学性能实验机NaOH 溶液:称取8g NaOH, 用水溶解并稀释至100ml。

  (4) 1 % 邻联甲苯胺溶液:称取0.1 g 邻联甲苯胺溶解于10 ml无水乙醇中,倒入棕色瓶中,4 ℃ 冰箱保接触疲劳实验机存。

  (5) 乙酸缓冲液 (pH 5.0):称取14.28 g 乙酸钠(CH3COONa•3H2O)溶于水中,加入2.7ml冰乙酸,并调理p耐电弧实验机H 5.0, 用水定容至1 L。

  (6)真3轴刚性伺服实验机 葡萄糖氧化酶溶液:称取1定量的葡萄糖氧化酶(Sigma 公塑料打包带拉力实验机司)用水溶解,使酶含量为100 U/ml。4℃冰箱保存1周。

  (7) 过氧化物酶溶平压强度实验机液: 0.010 g 辣根过氧化物酶溶于10 ml 水中,4 ℃ 冰箱保存1周。

  (8) 酶溶液:取100 ml乙酸缓冲液,分别加入邻联甲苯胺溶液、葡萄糖氧化酶溶液、过氧化物酶溶液各1ml,混匀。4℃冰箱可保存7周。

  (9) 酶空白液:取100 ml乙酸缓冲液,分别加入邻联甲苯胺溶液、过氧化物酶溶液各1ml,混匀。4℃冰箱保存1周。(注意酶空白液中不含葡萄糖氧化酶)

  (10) 葡萄糖标准液:将葡萄糖标金属板材万能实验机准品(纯度大于99%)于80 ℃干燥至恒量。精确称取0.050g,用水移入100ml容量瓶中,定容至刻度波纹管实验机线。相当于浓度为0.5 mg/ml。

  5.操作步骤:

  5.1样品处理:

  (1)固体样品:称取0.5~5g已粉碎的样品于锥形瓶中,加入50ml水后沸水浴15min。冷却后,转移至100ml容量瓶中并用水定容至刻度。反复摇动混匀样品,过滤,弃初始几滴滤液。搜集滤液。如果滤液澄清,可直接或经进1步稀释后用于测定。如果滤液浑浊,汲取20ml滤液转移至另外一容量瓶中,加入无水乙醇至刻度。混合后静置最少30min。过滤,滤液用于测定。

  (2)液体样品,寡糖、淀粉等碳水化物水解液:汲取2~10ml样品或水解液,加入4倍量乙醇,混和。静置最少30min,过滤后滤液备用。(如果过桌上型高低温实验机滤后滤液仍浑浊,或松江实验机样液体积过少,可3000rpm离心15min,上清液备用。)

  (3) 新鲜牛乳等样品:汲取0.5~2ml 样品,用水稀释,加入3ml40%3氯乙酸溶液。用水定容至100ml,过滤。汲取5ml滤液,用2 mol/LNaOH调理pH至中性,用水定容至10ml,备用。

天皮耐磨实验机

  (注:样品处理中80% 乙醇的用处是沉淀不溶性多糖和部份蛋白质,40% 3氯乙酸用于沉淀蛋白。)

  5.2测定:标准管和样品测定管,按下表所列操作(单位:ml)

 why800压力实验机 试 剂标准空白管葡萄糖标准管样品空白管样品南方精科拉力塑料悬臂梁冲击实验机实验机测定管

边压环压实验机  葡萄糖标准液——0.1~0.5————

  样品提取液————0.50.5

  水0.5补至0.5————

  酶溶液55—&m电线低温拉伸实验机dash油管水压实验机;5

  酶空白液————5——

  上述试剂混合后37℃ 水浴反应 15 min, 625 nm 测定吸光度值。

  (注意:葡萄糖与酶溶液的成泡棉回弹力实验机色反应与反应时间密切相干,如反应时间太长,溶液色彩会由蓝转变成灰色,并渐渐产生沉淀,所以反应时间应严格控制好。)

  6.计算

  根据吸光度值求出葡萄糖标准曲线的回归方程,采取插入法求出样品测定管中葡萄糖含量,再根据稀释定容体积和称样量,计算出样品中葡萄糖含量。

  计算公式:

光缆曲折实验机

  微机控制环刚度实验机X= (As-Ab)×V×F×0.1

  0.5×m

  式中:1t弹簧疲劳实验机

  X——样品中葡萄糖含量,g/100g;

  As—— 由标准回归方程求出的样品测定管中葡萄糖含量,mg;

  Ab——由标准回归方程求出的样品空白管中葡萄糖含量,滚筒磨擦实验机mg;

  V—&mdash绝热材料高温测试仪/实验机;样品定容体积,ml;

  F——稀释倍数

  0.5——测定时汲取样品提取液的体积,ml;

工程仪器万能实验机

  m——样品质量,g;

  0.1——将mg/g转换成g/100g座椅复合耐久实验机的系数。

  7.注意事项

  (1) 此方法中的酶溶液只能和葡萄糖反应,特异性强,灵敏度高。

  (24会盐雾实验机)如果样品提取液为无色,无需做样品空白。但是有些样品色彩很深,如饮料、菌插头升温实验机藻类食超低温冲击实验机物,或样品提取液浑浊,常常干扰测定结果但又难以去除,所以测定这类样品时需做样品空白管以减少干扰。

食品中葡萄糖的测定
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